1  实验器材

干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器（1ml）、黑色记号笔、固定大鼠用自制拉钩、大鼠板、EP管。手术器械：眼科剪1、弯镊1对、动脉夹2、止血钳2-3、缝合线、缝合针。栓线：采用特制购买栓线

2  实验试剂

TTC染液的配制：TTC用去离子超纯水配成2%TTC溶液（pH7.4），避光保存。麻醉剂：2%戊巴比妥钠

3  造模步骤

3.1 SD大鼠称重，7%水合氯醛（0.5ml/100g）麻醉。将大鼠用医用胶带固定于操作台上，颈部剃毛。

3.2 颈部酒精棉球消毒，眼科剪沿锁骨正中做竖向切口，长度约3~4cm左右。

3.3 分离皮下肌肉组织，可见底部肌肉下方有轻微搏动即为颈总动脉，钝性分离覆盖于颈总动脉上方的肌肉，当分离出颈总动脉后，眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经，继续小心分离干净动脉周围粘膜组织，分离出的颈总动脉大约1~1.5cm左右即可。

3.4 小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织，此时可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布，分离出独立的两根动脉（颈外、颈内）。血管分离完毕后，结扎颈总动脉（越靠尾部越好）。

3.5 再结扎颈外动脉，两个结扎之间备线，打松结。

3.6 动脉夹暂时夹闭颈内动脉。在备线与颈总动脉结扎处之间，用眼科剪做一“V字形”切口，在离Y字形分叉处约0.8 mm处位于血管的正前部剪一“V”形切口，使血管在自然状态下，用眼科镊夹持栓线，缓慢进入颈内动脉，到达动脉夹时，将预留的线稍微拉紧（防止远心端回流渗血），松开动脉夹，将颈总动脉稍向右拉继续插入栓线，当特制栓线黑色标记处到达Y字形分叉口附近时，此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

3.7 栓线插入完毕后，将预留的结扎线拉紧固定。医用小棉签清理颈部血块，逐层缝合皮肤，酒精棉球消毒，将大鼠放回笼子。1.5 h过后，麻醉大鼠，颈部消毒，打开一个小口，用眼科镊夹住栓线固定处将栓线拔出至其头端，剪去多余栓线，逐层缝合，消毒；假手术组仅剥离颈总动脉后立即缝合创口。术后放回笼子，给予充足饲料和水。

4  模型评判标准

4.1 大鼠苏醒后，参照Zea Longa 5分制评分标准：0分代表无神经缺损症状；1分代表不能完全伸展对侧前肢；2分代表行走时向偏瘫侧转圈；3分代表行走时向偏瘫侧倾倒；4分代表不能自发行走、意识障碍；5分代表死亡。累积1分及以上即为造模成功；但凡达到5分、解剖发现蛛网膜下腔出血或无神经功能缺损症状（0分）均视为造模失败。

5  操作注意事项

5.1分离颈部肌肉时，两侧小块肌肉叫鼓泡腺体（很多人误认为是甲状腺），避免损伤导致出血。

5.2见到颈动脉鞘了则要注意细致分离迷走神经，若损伤则可能影响其呼吸而死亡的。

5.3栓线不能反复进退，否则及容易造成蛛网膜下腔出血，而且很容易误解为模型成功，因为这时的神经功能改变也很明显，但并不是由于栓塞引起的。

5.4大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型，梗死体积出现的最小时间点可能为 2 h，体积随时间进行性增大，至 12h 基本趋于稳定。